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文章背景简介

BACKGROUND INTRODUCTION

肿瘤相关成纤维细胞（CAFs）是肿瘤微环境中主要的基质细胞，以前的研究认为：CAFs可以通过促进肿瘤生长、血管生成、化疗耐药和新陈代谢来促进癌症的进展。有趣的是，从人类癌症中分离出的原发性CAFs即使在体外也能长期保持活性。然而，这种现象的本质在很大程度上仍不为人知。由于缺乏特定的CAF标记或基因标签，且来源众多，研究人员提出了一种假设：CAF是一种“细胞状态”而不是一种“细胞类型”，CAFs可以维持在稳定的激活状态，促进肿瘤的恶性发展，并且CAFs也可以依赖于环境因素的改变而可逆。将活化的CAFs逆转为失活的成纤维细胞状态，已被视为一种由CAFs驱动的癌症治疗方法。因此，了解维持CAF细胞状态的分子机制将可以优化CAF驱动的癌症治疗策略。

癌症研究人员有一个共识：CAFs经历了非常罕见的体细胞突变，但其中DNA甲基化等表观遗传事件的发生频率更高。一系列证据表明，正常成纤维细胞（NFs）与癌细胞之间的旁分泌干扰导致了NFs中的DNA甲基化修饰，这在将NFs转变为CAFs以及CAFs功能中发挥了核心作用。DNA甲基化修饰是支持CAF表型出现的可能机制。

之前的研究已经表明：癌细胞产生的转化生长因子β1（TGF－β1）能够下调miR－200s的表达导致它们靶基因上调，其中一个miRNA的靶基因TCF12有助于CAF的激活。miR－200s基因表达的下调与DNA甲基化有关，因此认为miR－200s的表观遗传沉默可能参与TGF－β1刺激的CAF状态。然而，与CAF有关的TGF－β1是否参与表观遗传还是有争议的。2019年，重庆医科大学第一附属医院Tang X等人在《Cancer Lett》（IF＝6．491，中科院分区1区）发表了题为“Autocrine TGF－β1／miR－200s／miR－221／DNMT3B regulatory loop maintains CAF status to fuel breast cancer cell proliferation”的文章。在本文中，作者表明miR－200s的表观遗传沉默与DNA甲基转移酶（DNMT3B）在CAFs中的表达升高一致。DNMT3B不仅是CAFs中高表达的miR－221的直接靶点，也是CAFs中低表达的miR－200b／c的靶点。建立和维护自分泌TGF－β1／miR－200s／miR－221／DNMT3B反馈环路对于CAF的状态至关重要。

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所用到的主要方法

METHODS

1．qRT－PCR；

2．Western blot检测；

3．荧光素酶报告基因检测；

4．酶联免疫吸附试验；

5．免疫荧光；

6．流式细胞术分析；

7．亚硫酸盐测序分析；

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文章主要内容摘要

ABSTRACT

即使没有癌细胞，肿瘤相关成纤维细胞（CAFs）也依然处于活跃状态。然而，CAFs持续活跃状态背后的分子机制基本上还未被揭露。本文发现在CAFs中，DNA甲基转移酶3B（DNMT3B）不仅仅是miR－200b、miR－200c和miR－221的靶点，还能够诱导miR－200s启动子的甲基化。使用外源转化生长因子β1（TGF－β1）长期培养正常成纤维细胞（NFs），会发现miR－200b／c降低而miR－221升高，二者对DNMT3B的作用相互抵消，使DNMT3B最终达到一个稳定的高水平。并且DNMT3B进一步导致miR－200的低水平表达，建立CAF的活化状态。与此同时，miR－200s／miR－221／DNMT3B信号通过促进CAF细胞自分泌产生TGF－β1来维持CAF状态。破坏自分泌TGF－β1／miR－200s／miR－221／DNMT3B信号通路会导致miR－200s启动子去甲基化并且进一步使CAF细胞恢复NF的表型。此外，我们也证实了，miR－141靶向TCF－12从而增强了CAFs产生CXCL12信号，后者刺激乳腺癌细胞中的c－Myc／Cyclin D1信号通路从而促进肿瘤生长。本研究表明：TGF－β1／miR－200s／miR－221 ／DNMT3B组成的调控环路负责维护CAFs的状态，并且对于CAF促进乳腺癌恶性表型的功能也是必要的，这个调控环路为针对CAF的设计乳腺癌治疗策略提供了一个潜在的目标。