近几十年来，肿瘤免疫治疗显示出巨大的抗癌潜力，免疫系统被激活以靶向恶性肿瘤。肿瘤免疫治疗的临床结果取决于肿瘤特异性抗原的存在，这是基于T淋巴细胞肿瘤免疫治疗的核心。

新抗原是一种来源于非同义突变的肿瘤特异性抗原，是肿瘤免疫治疗的非常有吸引力的靶点。识别相关肿瘤特异性抗原及其同源TCRs是基于新抗原靶向治疗的重要基础。为此，体外扩增的自体TILs和／或外周血淋巴细胞（PBL）通常用于肿瘤抗原发现。然而，PBL和TIL中新抗原特异性T细胞的频率通常较低，此外，尽管有开创性的工作改善了血液中新抗原反应性的检测，但PBL中的抗原发现仍然具有挑战性。

NeoScreen，是一种体外TIL扩增和筛选方法，旨在优化抗原验证的敏感性，并分离罕见的肿瘤抗原特异性CD8＋ T细胞，用于从高度富集的肿瘤抗原特异性CD8＋T细胞克隆同源TCR。与仅依赖于IL－2的传统培养方法不同，NeoScreen是基于将TIL早期暴露于装载肿瘤特异性抗原的自体抗原呈递细胞（APC）。

研究选择了CD40活化的B细胞作为APC，因为相对于树突状细胞，它们很容易从少量血液中获得和扩增，并且很容易通过电穿孔进行工程化。此外，为了优化APC效价，通过电穿孔RNA表达免疫刺激性4－1BB配体（4－1BBL）、OX40配体（OX40L）和IL－12。

通过在七名患者中测试NeoScreen显示新肿瘤抗原的能力，研究发现，NeoScreen能够识别7名患者中的19个肿瘤表位。在19个表位中，有9个表位的特异性TIL在NeoScreen中的出现频率明显高于常规培养，而对于19个表位中的10个表位，肿瘤抗原特异性TIL仅在NeoScreenTIL中发现。总的来说，与使用传统策略每位患者识别1个表位相比，使用NeoScreen的患者平均识别三个肿瘤表位。

NeoScreen除了可以敏感识别肿瘤新抗原外，它还能够敏感地分离针对肿瘤抗原的相关TCR。使用pMHC复合物或4－1BB上调纯化肿瘤抗原特异性新筛选TIL，并对分离的T细胞进行TCRα和TCRβ批量测序。通过追踪原始肿瘤和NeoScreen扩增TIL中经验证的TCRβ序列，确定NeoScreen过程确实导致肿瘤抗原特异性TIL的显著扩增。如代表性PHLPP2N1186Y特异性TCR所示，所有三种TCR均在原始肿瘤中检测到，并且它们各自的频率在NeoScreen扩增TIL中显著增加。

50个克隆的累积数据证实了NeoScreen识别新抗原或TAA特异性新TCR的潜力，这些新抗原或TAA在传统TIL中未检测到。总的来说，与传统TIL相比，NeoScreen的 TIL中肿瘤抗原特异性TCR显著富集了几个数量级。

最后，在人类IL－2转基因NOG小鼠模型中使用患者来源的异种移植肿瘤，验证了NeoScreen识别的TCR是否可用于基于TCR的个性化过继性细胞疗法（ACT）。结果显示，与过继转移的常规外周血T细胞相比，从NeoScreen TIL克隆的肿瘤抗原特异性TCR－T细胞，特异性地抑制了肿瘤生长。这支持了使用NeoScreen进行TCR－T细胞治疗的可行性。

总的来说，NeoScreen，这是一种能够对肿瘤新抗原进行高度敏感筛查的方法，并产生了可能比目前更广泛的肿瘤抗原反应性TCR。NeoScreen能够高效识别黑色素瘤以及卵巢癌、结直肠癌和肺癌中的肿瘤特异性抗原，并且能够高度敏感地分离同源肿瘤反应性TCR。因此，NeoScreen代表了一种有价值的手段，可以为癌症疫苗选择相关的个性化靶抗原，并且分离出肿瘤反应性TCR，用于实体瘤的个性化TCR－T细胞治疗。

       原文标题 : NeoScreen：一种敏感识别新抗原和同源TCR的新方法