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文章背景简介

BACKGROUND INTRODUCTION

宫颈癌是全球第四大女性常见癌症，造成了巨大的疾病负担，特别是对低收入或中等收入家庭。此外，子宫颈癌是女性中第二大致命性癌症，预后差，生存率低。因此，人们对宫颈癌的发病机制进行了广泛的探索。

环状RNA(circRNA)是一种闭环结构的非编码RNA分子，已被证明参与宫颈癌的发展，其功能是调控基因表达。在之前的研究中，环状RNA被报道为宫颈癌的生物标志物。例如circ-0031288与宫颈癌细胞的迁移、侵袭和增殖有关；Circ同源结构域相互作用蛋白激酶3(circHIPK3)被发现可促进宫颈癌上皮间质转化，加速宫颈癌的进展。有报道称Circ-0000520在胃癌和肝细胞癌中异常表达，hsa-circ-0000520如何在宫颈癌中发挥作用仍有待研究。

有研究表明miR-1296参与了宫颈癌细胞的凋亡，然而miR-1296参与的详细调控机制在很大程度上仍然有待阐明。环状RNA被证明与microRNAs (miRNAs)结合，并影响不同癌症的发展，例如，hsa-circ-0005576被发现可调节宫颈癌细胞中miR-153的表达。Hsa-circ-0000520与miR-1296之间的相互调节机制尚未有研究报道。

苏州科技城医院病理科的Qingling Zheng等于2021年在《Journal of Translational Medicine》（IF=6.1，Q2，Top）发表了《Hsa-circ-0000520 overexpression increases CDK2 expression via miR-1296 to facilitate cervical cancer cell proliferation》。论文旨在研究hsa-circ-0000520在宫颈癌中的作用及其潜在的调控机制，确定宫颈癌的潜在治疗靶点。

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所用到的主要方法

METHODS

1、生物信息学分析

2、临床样品及细胞培养

3、RT - qPCR和Western blot分析

4、双荧光素酶报告基因测定

5、免疫组织化学(IHC)

6、RNase R线性RNA消化实验

7、RNA荧光原位杂交(FISH)

8、细胞转染

9、克隆形成实验

10、细胞计数试剂盒(CCK - 8)测定

11、5 - 乙炔 - 2′ - 脱氧尿苷(EdU)测定法

12、RNA结合蛋白免疫沉淀(RIP)测定

13、流式细胞术

14、裸鼠移植瘤的形成

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文章摘要

ABSTRACT

论文首先通过生物信息学方法预测了hsa-circ-0000520在宫颈癌中的作用，结果显示hsa-circ-0000520在宫颈癌中高表达。基于生物信息学的结果作者对52对临床标本中采集的宫颈癌组织及癌旁正常组织进行RT-qPCR，确定了hsa-circ-0000520在宫颈癌组织和细胞中的高表达。RNase R消化实验证实hsa-circ-0000520具有环状RNA的特性，核质分离和FISH实验显示hsa-circ-0000520主要定位于细胞质。

细胞实验显示：沉默hsa-circ-0000520可抑制癌细胞增殖和诱导细胞凋亡，宫颈癌细胞的增殖能力显著下降，细胞周期阻滞在G0/G1期，S期细胞减少。研究发现hsa-circ-0000520缺失诱导P21和P27表达增加，细胞周期相关蛋白CyclinD1表达降低，凋亡相关蛋白Bax表达增加，Bcl-2表达减少。因此，沉默hsa- circ-0000520能够阻断宫颈癌细胞周期的进展。

生物信息学分析和双荧光素酶报告基因检测都揭示了hsa-circ-0000520与miR-1296之间的靶向关系，两者存在结合位点，过表达hsa-circ-0000520可以抑制miR-1296的表达。沉默hsa-circ-0000520或过表达miR-1296会抑制CDK2的表达，而抑制miR-1296则会增加CDK2的表达。

TCGA数据库数据分析和RT-qPCR实验结果显示CDK2在宫颈癌中高表达，双荧光素酶报告基因实验证实miR-1296与CDK2存在结合位点。随后，研究证明hsa-circ-0000520介导的miR-1296抑制能够促进CDK2在宫颈癌中的表达。

论文进一步通过体内实验验证hsa-circ-0000520/miR-1296/CDK2在宫颈癌中的作用。裸鼠移植瘤实验结果表明，沉默hsa-circ-0000520或CDK2可减轻移植瘤的重量和体积，抑制移植瘤的生长，而过表达CDK2则会促进肿瘤生长。

因此，论文实验结果揭示了hsa-circ-0000520通过抑制miR-1296表达，进而上调CDK2，促进宫颈癌细胞增殖和肿瘤形成的分子机制，提示hsa-circ-0000520作为宫颈癌预后判断的生物标志物和潜在治疗靶点的重要性。

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文章主要内容

CONTENT

（1）对临床标本中采集的52对宫颈癌组织及癌旁正常组织进行RT-qPCR，结果显示Hsa-circ-0000520在宫颈癌细胞中高表达。

（2）hsa-circ-0000520调节了细胞周期的分布并且能够促进宫颈癌细胞增殖。

（3）hsa-circ-0000520可以与miR-1296结合，miR-1296在宫颈癌组织中的表达降低，Hsa-circ-0000520能够抑制miR - 1296的表达，并且两者可以结合共同发挥作用。

（4）Hsa-circ-0000520能够通过与miR - 1296结合调控CDK2的表达。

（5）沉默hsa-circ-0000520可通过miR - 1296抑制宫颈癌细胞增殖。

（6）Hsa-circ-0000520敲低通过miR - 1296下调CDK2抑制宫颈癌细胞增殖。

（7）通过裸鼠肿瘤发生研究验证Hsa-circ-0000520 在体内通过miR - 1296/CDK2轴促进人宫颈癌细胞的肿瘤发生。

       原文标题 : 环状RNA Hsa-circ-0000520通过miR-1296增加CDK2表达，促进宫颈癌细胞增殖