1．4  常用灭菌方式

4、液体、气体、或水溶性物质－－过滤除菌法

器具：细菌过滤器

用途：不耐高温的液体、气体、水溶性物质的除菌。

无菌操作

无菌操作的原则

超净台无菌操作  

洁净区无菌操作

普通区无菌操作

2．1 无菌操作的原则

操作前准备

必须明确物品的无菌区和非无菌区；

操作人员需穿实验服、戴口罩及洗手，并将手擦干。同时注意空气和环境清洁。

无菌物品的管理

无菌物品必须保存在无菌包或者灭菌容器内，不可暴露在空气中过久。

无菌物品和非无菌物品应分开放置。

无菌包一经打开即不能视为绝对无菌，应尽早使用。

凡已取出的无菌物品虽未使用，也不可再放回无菌容器内。

操作过程

进行无菌操作时，凡未经过消毒的手，臂均不可直接接触无菌物品或者超过无菌区取样。夹取无菌物品，尽可能使用无菌镊子。

2．2 超净台无菌操作

超净空气的流速为24～30m／min，这已足够防止附近空气可能袭扰而引起的污染，也不会妨碍酒精灯等对器械的灼烧消毒。可除去大于0．3μm的尘埃、真菌和细菌孢子等等。

超净台操作规程

使用工作台时，应提前30分钟开机，处理操作区内表面积累的微生物，开启紫外灭菌灯；

20分钟后关闭灭菌灯，启动风机；

实验结束后，用消毒液擦拭工作台面，关闭工作电源，重新开启紫外灯照射15分钟。

操作区内不允许存放不必要的物品，保持工作区的洁净气流流型不受干扰；

操作区内尽量避免作用明显扰乱气流流型的动作；

操作区的使用温度不可以超过60℃。

2．2 超净台无菌操作

2．2 超净台无菌操作

培养皿操作

培养皿开合：单手打开和盖上皿盖，

包括持皿法和皿加法两种。

此操作用于制作培养基平板、接种等。

2．2 超净台无菌操作

培养皿操作

皿加法是将培养皿放在火焰附近 的桌面上，用左手的食指和中指夹住管塞，并打开培养皿，再注入 培养基，摇匀后制成平板。

2．2 超净台无菌操作

接种环操作

灼烧接种环

先斜放外焰灼烧接种环，然后垂直放置后继续灼烧，再斜烧金属杆。

2．2 超净台无菌操作

接种环操作

2．2 超净台无菌操作

涂布棒操作

灼烧灭菌可以沾酒精然后灼烧，灼烧范围要包括其杆部。涂布将藻液滴在培养基表面中央。右手拿涂布棒将藻液沿一条直线来回推动，然后沿一垂直线来回推动，平板边缘处可改变方向再涂几次。

2．2 超净台无菌操作

接试管操作

2．3 洁净区无菌操作

洁净区主要污染来源

工作人员：约占50～80％或更高

生产设施及物料：约占15 ～30％

环境设施：约占5％ ～20 ％

2．3 洁净区无菌操作

主要污染源

人是最大的污染源

人体、内衣、工服外饰、卫生、习惯和行为均会产生大污染；

其中皮肤、头发、口、鼻（眼等）、工服工鞋和化妆品等均是主要污染源；

2．3 洁净区无菌操作

人员污染源主要包括以下两个方面：

自身产生：自身产生指的是头发、皮肤等脱落物、体表与呼吸道的排出物。

携带：携带指任何可能附着在人体、衣服上的各种尘埃粒子和微生物。

污染的形式：尘埃粒子、微生物

污染的载体：空气、液体、表面

研究资料介绍：

咳嗽1次：散发约70万个尘粒

喷嚏1次：散发约140万个尘粒

交谈1分钟：1．5 万～2．0 万尘粒

头及皮肤上有几万个到几百万个微生物

指夹污垢中有几千万个到几十亿个微生物

每只手可携带40万个细菌；刚洗过的手，每平方厘米也可检验出3200个细菌

2．3 洁净区无菌操作

操作人员的污染有多大？

打喷嚏（左）培养头发（右）

2．3 洁净区无菌操作

操作人员的污染有多大？

2．3 洁净区无菌操作

为尽量减少进入洁净区的人数和次数。

进入洁净区的人员应保持最少人数。检查和控制应尽可能在洁净区外面进行，生产无关人员尽量不进入洁净区。

人员在进入无菌区前应用无菌消毒剂（如75％酒精）消毒双手，待消毒挥发干后方可进入无菌区域。

仅用无菌工具接触无菌物料。

在处理已灭菌物料时，始终须使用无菌器具，在每次使用期间，无菌工具应保存在A级环境（无菌袋、平皿桶、超净台等）中，保存方式应能避免污染。在操作全过程中，应在必要时更换器具。

2．3 洁净区无菌操作

快速移动会在关键区域产生紊流。它们破坏洁净区单超越洁净区设计及浙制参数的不良状况。缓慢和小心移动是洁净区内始终遵循的基本原作应尽缓，尽下蹲动作，更不应躺在地面或坐在地面上。如果维修不可避免这些动作时，维修后应立即更换衣服，并避免交叉污染。

进去结净区后应定期检查着装，尤其在进行动作幅度较大的操作之后应确认头套脚套是否穿戴紧密。

为保持无菌物料附近的无菌状态，应在适当的侧面进行操作，在垂直单向流条件不得在产品上游方向进行无菌操作

2．3 洁净区无菌操作

不在洁净室内作非有关事项或不正确的行为。

不在洁净室使用错误的擦布或清洁物料。

不得摘下口罩和包饰（交谈或呼吸）。

进入洁净区需随手关门，不得同时开启两扇或多扇门，以保持室内压差。

洁净区内开关门速度不宜过快。

传递窗门不得同时打开两边。

在洁净区的任何时候，双手都不应接触地面。如果不小心接触了地面，那么必须立即用75％酒精进行消毒。

进入洁净区不得用手接触口罩、鼻子、额头、眼睛、及祼露部位，若接触后需及时消毒。

严禁面对工作区咳嗽和打喷嚏，避免不了可面对回风口，避开工作区。

不得在回风口处理堆存物品，阻碍换风。

2．4 普通区无菌操作

空气

避免在通风口正下方或正前方操作。

可在酒精灯旁或者万向抽气罩下方进行操作，以让空气形成向上气流。

操作过程应迅速，动作幅度小，其他人员避免在旁边走动，以避免产生气旋。

器械

玻璃器械、气石、气管、枪头、封口膜等器械耗材应湿热／干热灭菌、烘干后才能使用。

油桶等不耐热器械，应提前紫外消杀或化学消杀才能使用。

避免未灭菌器械耗材直接接触藻液；

环境人员

每次操作前提前用75％酒精喷洒周边环境，喷砂操作台，并用已灭菌抹布擦拭干净。

操作人员需带上口罩、一次性头罩，用75％酒精消毒双手才可进行操作。

操作前后均需用火焰喷枪进行瓶口消杀。

操作结束后及时清理台面，用75％酒精擦拭消毒。

（5）藻类水处理微生物学

不同废水成分分析

猪场废水预处理

以废水固碳再利用于微藻养殖之模组化技术开发

利用开发猪场废水培养小球藻生物量和油脂的研究

建立10吨微藻循环养殖模组

（6）藻类开发

以微藻制备石斑鱼苗饵料

以抗弧菌之微藻开发虾饲料

另外还有以微藻生产1叶黄素2藻蓝素3虾红素4多不饱和脂肪酸

现在商业化产品

（7）藻类未来拓展

创新畜牧处理废水处理循环经济模式

畜牧废水处理及藻类虾红素生产循环经济模式

藻类培养的基础科学技术。为学生提供了在藻类养殖行业工作或创建自己的藻类养殖企业所需的技能。学生将学习成功培养各种受控环境要求的藻类。所获得的知识将使学生为从事温室／农业工人、工厂技术员、工厂经理、实验室技术员、销售经理、公共关系和外联、过程协调员、推广服务和／或企业所有者／经理等工作做好准备。

学习成果总结

完成本课程后，学习者将能够：

创造和维护一个安全的工作环境

设计、安装、维护和操作可持续藻类养殖系统

找出浪费的做法并推荐可持续的替代方案

测量和描述能源及其与可持续系统的关系

阐明创业精神和创建可持续小企业的原则

课程概括：

（1）藻类简介

（2）藻类培养和繁殖

（3）藻类光生物反应器设计

（4）藻类卫生与安全

（5）藻类水处理微生物学

（6）藻类开发

（7）藻类未来拓展

（8）藻种富集培养、藻种提纯、藻种保存方法介绍

可持续农业实践影响生态健康

学习受控环境农业了解如何帮助振兴农业生产和支持当地的粮食系统。具体来说，你将学习温室操作和管理技术；水产养殖和水培生产系统；和各种可持续的方法来提高所有作物的产量。

水产养殖学是综合多营养水产养殖（IMTA）的一个方面，它将水培科学（在没有土壤的水中生长植物）与水产养殖科学（养鱼）结合在一起。

鱼废料产生大量氮，通常被水产养殖场浪费掉。在这种循环系统中，这些废物与精选的几种矿物质补充剂（如螯合铁）结合在一起，为多种作物的超常生长提供生物有机肥燃料。虽然营养作物，如草本植物、莴苣、卷心菜和羽衣甘蓝，生长最快，但它同样也是生长结果／开花作物的高效方法，如西红柿、辣椒、茄子、甜瓜和观赏花。

光生物反应器

封闭的生物反应器最初的成本是开放池的10倍，但封闭的生物反应器系统的单位面积产量是传统的方法5至10倍。它们通过最大限度地吸收来达到营养和能量在一个最小的水量控制下条件的目的。藻类生长在管道中，水是连续泵送循环的。这种混合是必要的，以防止藻类细胞的沉降和支持二氧化碳和O2氧气的均匀分布。所有增长结构的设计目标是最大限度地提高表面体积比，并在最佳光强下提供光饱和。

图1：藻类养殖方法

家庭藻类光生物反应器－改善你的空气和生活方式！

这种简单的藻类光生物反应器每年可以从大气中清除高达24磅的co2同时给你的家充氧，改善空气质量。此外，该设备可用于生长和收获螺旋藻（蓝绿藻），一种基于藻类的超级食品。可以有多种藻的颜色来适应任何空间。

光生物反应器的工作原理是通过一个小型气泵让空气通过水，这个气泵将插入墙上的插座。藻类然后消耗二氧化碳，光合作用，产生氧气。藻类品种可以在本公众平台上购买。

藻类产品机会亮点

藻类产品是可再生和可持续的。藻类种类繁多，给各个行业带来商机。从微藻和巨藻中可以衍生出各种各样的产品——从食品和营养食品到特殊化学品。

营养制品／食品：藻类是许多营养制品的原料，健康意识的提高也导致营养制品部门对藻类产品的需求增加。

制药：使用藻类，特别是蓝细菌（蓝绿藻）作为抗生素和药理活性化合物越来越受到关注。有一系列可以从藻类中提取的药物产品，如治疗产品、药物、抗菌剂等。

生物塑料：随着对塑料使用的日益关注，对塑料的可持续替代品的需求也越来越大。一般的生物聚合物，特别是生物塑料，提供了这样一种可持续的选择。目前，生物塑料由第一代和第二代原料制成。然而，公司正在寻找更可持续的替代品，如藻类，这在未来的生物塑料制造中有很大的潜力。机遇存在于各种工业领域，包括包装、水、饮料、绝缘材料、特种材料等。

动物饲料：微藻富含蛋白质，许多菌株具有理想的氨基酸特征。许多动物和鱼类饲料公司现在开始探索藻类作为蛋白质来源。藻类应用增长最快的领域之一是水产养殖。

由于对这类产品的需求很大，而且还在增长，并且有着全球范围的需求，许多企业家热衷于涉足藻类产品业务。

谁将受益于藻类为基础的商业机会？

热衷于了解藻类带来的各种商机的公司和企业，尤其是那些热衷于以下一个或多个细分市场的公司和企业：

食品和营养制品

人类食物和食物补充剂

动物和鱼类饲料–虾饲料、贝类饲料、海／淡鱼幼体养殖

生物聚合物和生物塑料

药品

环保油漆、染料和着色剂

环保润滑剂

环保化妆品

环保农用化学品

请

请拥抱我

许来日方长

那年的毕业晚会灯光绚烂，我们仿佛看不见彼此哀伤的容颜。说好了以后要常相见，却不料从此再未起见。